Atividade enzimática: U/mL e atividade específica por variação de absorbância
Informe ΔAbs/min, ε, caminho óptico, volumes, diluição e proteína para ver U/mL, U/mg, kat/kg e o consumo de substrato.
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Resultado
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Da absorbância à atividade
atividade no ensaio = ΔA/min ÷ (ε · l); U/mL da amostra = ΔA/min · V_ensaio ÷ (ε · l · V_amostra) · diluição; U/mg = (U/mL) ÷ (mg/mL de proteína); kat/kg = (U/mg) ÷ 60
Com ΔA/min de 0,03, ε de 6,22 mM⁻¹cm⁻¹ e caminho óptico de 1 cm, a velocidade no ensaio é de 0,00482 µmol/min por mL. Com 0,05 mL de amostra num ensaio de 1 mL e diluição de 1 vezes, a atividade é de 0,0965 U/mL; com 2 mg/mL de proteína, a atividade específica é de 0,0482 U/mg, ou 0,000804 kat/kg (1,61 nkat/mL).
Taxa inicial
Em 3 min com 0,2 mM de substrato, o consumo é de 7,23%. Com 5 min e 0,1 mM de substrato, o consumo sobe a 120,58%, acima do limite de 10%: a taxa já não é inicial e o ensaio deve ser encurtado ou repetido com menos enzima.
Limites
- Uma unidade (U) é a quantidade de enzima que transforma 1 µmol de substrato por minuto nas condições do ensaio; informe o ε na unidade mM⁻¹cm⁻¹ (por exemplo 6,22 para o NADH a 340 nm).
- Use a parte linear da curva para obter ΔA/min e confira se a velocidade é proporcional à quantidade de enzima.
- O limite de consumo (padrão de 10%) é uma convenção para validar a taxa inicial; ajuste conforme o seu protocolo. A página não substitui o método do laboratório.
Perguntas frequentes
Como usar a atividade enzimática calculadora?
Informe ΔAbs/min, ε, o caminho óptico, os volumes, a diluição e a proteína. A página calcula as unidades por mL e por mg.
Como calcular as unidades por ml u/ml?
U/mL = ΔAbs/min · volume do ensaio ÷ (ε · caminho óptico · volume de amostra), multiplicado pela diluição da amostra.
Como calcular a atividade específica u/mg?
Divida a atividade em U/mL pela concentração de proteína em mg/mL. Para kat/kg, divida o resultado em U/mg por 60.