Master mix de PCR: volumes por componente para N reações com excesso
Informe o volume final, o número de reações, o excesso e os componentes para ver o volume de cada um no mix, a água e o total.
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Resultado
O resultado aparece aqui.
Volumes por reação e para o mix
volume do componente = volume final · concentração final ÷ concentração do estoque (ou o volume fixo); água = volume final − DNA molde − soma dos componentes; volume no mix = volume por reação · reações · (1 + excesso ÷ 100)
Para 8 reações de 25 µL com 10% de excesso, o mix é preparado para 8,8 reações. O tampão ocupa 2,5 µL por reação (22 µL no mix), os dNTPs 0,5 µL, cada primer 1 µL e a polimerase 0,25 µL. A água é de 17,75 µL por reação, o mix total tem 202,4 µL e cada tubo recebe 23 µL de mix mais 2 µL de DNA.
Outro protocolo
Com 12 reações de 20 µL e 15% de excesso, a água por reação é de 11,3 µL e o mix total é de 262,2 µL.
Como preencher
- Para um componente com estoque e concentração final (por exemplo tampão 10X para 1X, dNTP 10 mM para 0,2 mM), preencha o estoque e a final na mesma unidade, e deixe o volume fixo em 0.
- Para um componente de volume fixo (por exemplo a polimerase, em µL por reação), deixe o estoque em 0 e informe o volume.
- Componentes sem uso ficam com estoque 0 e volume 0. O DNA molde é pipetado em cada tubo, fora do mix. Se a água der negativa, o protocolo não cabe no volume final.
Perguntas frequentes
Como usar a calculadora master mix pcr?
Informe o volume final, as reações, o excesso e, para cada componente, o estoque e a concentração final ou um volume fixo. A página dá o volume de cada um e a água por diferença.
Quanto de excesso de pipetagem pcr usar?
Costuma-se preparar 5% a 10% a mais para compensar a perda ao pipetar; o valor é seu, e a página preenche o excesso que você digitar.
Como calcular volumes para n reações pcr?
Calcule o volume de cada componente por reação (volume final vezes concentração final ÷ estoque), multiplique pelo número de reações com excesso e some a água por diferença.